產(chǎn)品中心

miRNA SYBR Green qPCR Mix

miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：

貨號	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價
P4308-100	miRNA SYBR Green qPCR Mix	100T*20ul	400
P4308-200	miRNA SYBR Green qPCR Mix	100T*20ul	750
P4308-500	miRNA SYBR Green qPCR Mix	500T*20ul	1600

產(chǎn)品介紹：
miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒采用本試劑盒采用SYBR Green I 嵌合熒光法的原理進行miRNA 熒光定量檢測。本試劑盒包含miRNA 熒光定量檢測的所有試劑，包括2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2×miRNA qPCR Mix（含Sybr Green）是專門為miRNA 定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量PCR 檢測試劑，其中的DNA polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式， 配合特殊的Buffer 體系，使反應(yīng)特異性更好，靈敏度更高，并能在更廣的范圍內(nèi)進行準確定量。
注：該試劑盒須與 miRNA cDNA Synthesis Kit(miRNA第一鏈合成試劑盒)（4205A）配套使用。

產(chǎn)品存儲：
-20 ℃ 避光保存至少6個月，使用前充分融解混勻。2 x miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在4 ℃，避免反復(fù)凍融。Reverse primer(10μM )每次用完置-20 ℃保存。

需自備的試劑：
1.分子生物學(xué)實驗級別的水（無核酸酶）
2.待檢測miRNA對應(yīng)的qPCR上游引物（Forward primer）

Forward Primer設(shè)計原則：
1.遵循引物設(shè)計的最普遍原則。
2.以成熟的miRNA 序列為基礎(chǔ)，將U 替換成T，這是最基礎(chǔ)和最簡單的設(shè)計方法。
3.試劑盒中提供的下游引物的Tm 值為65℃，設(shè)計上游引物的Tm 值要盡量保證在65℃左右。
4.若按照原則2 的方式直接設(shè)計的引物其Tm 值過低，可以在引物的5’端添加幾個堿基（最好為G 或C 堿基）；也可以在3’端添加1 個或幾個A 堿基；或者5’端和3’端同時修飾。
5.若按照原則2 的方式直接設(shè)計的引物其Tm 值過高，可以在引物的5’或3’端去掉幾個堿基。

注意事項：
1.miRNA 第一鏈cDNA 的加入量不要超過real time PCR 體積1/10。
2.對于特殊的檢測體系中，高含量的cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴增，根據(jù)所檢測miRNA 的豐度適當?shù)南♂宑DNA（10倍或者100倍）。
3.本品中含有熒光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反應(yīng)液時應(yīng)避免強光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含參比染料ROX，客戶并根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX參比染料，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差，配套ROX產(chǎn)品貨號為PC38 Rox Reference Dye。

操作步驟：
1. 在室溫融化2 x miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。
2. 使用時請將2 x miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經(jīng)輕微離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會有所下降。注：請不要使用振蕩器混勻。
3. 按照下表組分冰上進行反應(yīng)液的配制