技術服務

服務介紹：

ELISA檢測是免疫檢測中的一項重要技術，該法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及可自動化操作等特點。目前已廣泛應用于臨床檢測及研究領域。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。ELISA方法也合適用于經(jīng)mRNA表達譜芯片、蛋白芯片或蛋白質(zhì)組學（質(zhì)譜）等實驗找出差異蛋白后，進一步驗證差異蛋白。

間接法ELISA檢測：用特異性抗原包被固相載體，加入待測的抗體樣品反應后，再加入酶標二抗，經(jīng)底物顯色后測定。

夾心法ELISA檢測：用第一抗原或抗體包被固相載體，加入待測的抗體或抗原反應后，再加入酶標的第二抗原或抗體，經(jīng)底物顯色后測定，即可計算出待測抗原的量。此方法所用抗原一般為大分子抗原，如蛋白等，不適用于多肽等半抗原。

競爭法ELISA檢測：用特異性抗體包被固相載體，同時加入酶標抗原和待測抗原的混合物樣本，待測抗原將與酶標抗原競爭與固相上抗體結合。經(jīng)底物顯色后測定，計算兩組數(shù)值之差即可推出待測抗原的量。此方法常用于測定小分子抗原。

服務內(nèi)容：
提供間接法ELISA檢測、夾心法ELISA測定和競爭法ELISA測定。
 
樣品要求：
1.客戶提供含待測樣品的標本（血清、血漿等），我們根據(jù)客戶的需要（定性、定量）制定技術服務路線。
2.需提供待檢測抗體和包被用抗原。
3.檢測的樣本為細胞培養(yǎng)上清、人和動物的血清、血漿時，樣本收集后應立即-20度保存，若長期保存應-80度保存。
4.樣本量的要求：若一個指標做復孔檢測應不少于250ul，做單孔檢測應不少于120ul。建議若客戶樣本量充足最好提供500ul以上。
5.客戶的樣本收集后，立即按要求保存，切忌反復凍融。外地客戶郵寄需要用干冰運輸，郵寄前請與技術支持溝通確認。

送樣運輸要求：
1、動植物組織樣本(干冰運輸)：
準確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉/分鐘，離心10分鐘，取上清液進行測定。
2、血清樣本(干冰運輸)：
全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于2-8℃ 3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。
3、血漿樣本(干冰運輸)：
可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進行分裝，并將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。解凍后的樣本應再次離心，然后檢測。
4、細胞樣本：
貼壁細胞：將細胞用PBS沖洗2次后，用細胞刮將細胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。
懸浮細胞：將培養(yǎng)液3000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉淀，干冰運輸。
細胞上清：標本于2-8℃，3000轉/分離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復凍融。

實驗流程(具體步驟以試劑盒說明書為準):
1.樣本準備：血清、血漿、組織勻漿、細胞上清;
2.操作步驟：
處理樣本配制標準品—加樣(標準品及樣本)—洗板，加檢測抗體溶液，孵育—洗板，加酶溶液，孵育— 洗板，加TMB底物— 加終止液50ul，立即450nm讀數(shù)(雙抗夾心法)
處理樣本配制標準品—加樣(標準品及樣本)—加酶溶液—加檢測抗體— 混勻孵育— 洗板，加TMB顯色— 加終止液50ul，立即450nm讀數(shù)(競爭法)
3.實驗結果：有樣本OD值代入標曲中計算出濃度，結果以EXCEL形式發(fā)出。

實驗結果展示：

ELISA檢測（代測），360元/次/96T