產(chǎn)品中心

First Strand cDNA Synthesis Kit(第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)

產(chǎn)品規(guī)格：

貨號(hào)	產(chǎn)品名稱	規(guī)格	目錄價(jià)
P4202-50	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	50T	700
P4202-100	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	100T	1200
P4202-1K	First Strand cDNA Synthesis Kit(第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒)	1000T	10000

產(chǎn)品介紹：

      本制品以RNA為模板，采用預(yù)混合技術(shù)，用5 × TRUE Reaction Mix（已經(jīng)預(yù)混合了TRUEscript Hˉ RTase/RNase Inhibitor Mix）高效合成第一鏈cDNA，操作簡單。制品使用通過基因重組技術(shù)克隆表達(dá)的點(diǎn)突變型RNase H活性缺失的M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶TRUEscript Hˉ RTase。 野生型的M-MuLV 包含的RNase H活性能夠催化降解DNA/RNA雜合體中的RNA，因此在cDNA第一條鏈的合成反應(yīng)中可能會(huì)降解RNA/DNA雜合體中的模板RNA。本酶M-MuLV(RNase Hˉ)的RNase H活性缺失，與M-MuLV 相比，具有更強(qiáng)的延伸能力和穩(wěn)定性，可用于較長的cDNA合成以及高比例的全長cDNA文庫的構(gòu)建等。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
合成cDNA片段長度最高可達(dá)12 kb。

適用范圍：
第一鏈cDNA合成?？捎糜诟呖截?、低拷貝基因的檢測。

使用方法：
第一鏈cDNA合成(以20 μl反應(yīng)體系為例) ：
1.加入：

Components	Volume
Total RNA/mRNA	50 ng-5 μg/5-500 ng
反轉(zhuǎn)錄引物	1 μl
5× RT Reaction Mix	4 μl
RNase free H2O to final volume	20 μl

注：真核生物mRNA帶Poly A尾和一些帶Poly A尾的病毒RNA，反轉(zhuǎn)錄引物可以選擇Oligo(dT)18(0.5 μg /μl)，原核生物或者不帶Poly A尾的病毒mRNA無法使用Oligo dT，因此反轉(zhuǎn)錄引物只能選擇Random Primer N6(0.1 μg/μl) 。 

2. 輕輕混勻
如用Oligo(dT)18或基因特異引物(GSP)42℃孵育30-50 min（如產(chǎn)物用于qPCR，42℃孵育15-20 min）

如用Random Primer，25℃孵育10 min，42℃孵育30-50 min（如產(chǎn)物用于qPCR，42℃孵育15-20 min）

3. 85℃加熱5 min 失活TRUEscript Hˉ RTase。

4. 得到的cDNA產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)，或在-20℃保存，并在半年內(nèi)使用；長期存放建議分裝后在-70℃保存。cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融。

RT-PCR
建議取1/10-1/5 體積(2-4 μl)的反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為PCR模板。豐度高的可以酌情適當(dāng)稀釋cDNA后使用。

注意事項(xiàng):
1.避免RNase污染。
2.為保證反轉(zhuǎn)錄成功建議使用高質(zhì)量的RNA樣品。
3.4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix  非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸頭外導(dǎo)致?lián)p失，用前請(qǐng)點(diǎn)甩離心后使用，并且避免吸頭外壁沾附損失。