技術(shù)服務(wù)

真核哺乳動物細(xì)胞憑借蛋白折疊和翻譯后修飾的優(yōu)點，使其蛋白更接近天然蛋白，從而獲得與天然蛋白相同的生物活性。由哺乳動物系統(tǒng)表達的重組蛋白通常應(yīng)用于功能蛋白，抗體生產(chǎn)和臨床疫苗等。

我們提供的哺乳動物細(xì)胞重組蛋白表達服務(wù)，主要包括目標(biāo)基因生物信息學(xué)分析，瞬時轉(zhuǎn)染表達，穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建，以及重組抗體的生產(chǎn)。我們通常采用無血清懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的方法，對HEK293（人胚腎細(xì)胞）和CHO（中國倉鼠卵巢細(xì)胞）等真核宿主細(xì)胞進行培養(yǎng)。

蛋白表達服務(wù)表單填寫：蛋白質(zhì)表達純化服務(wù)表單

服務(wù)內(nèi)容簡介

1.高表達質(zhì)粒構(gòu)建與優(yōu)化
將客戶的cDNA克隆至哺乳動物瞬時/穩(wěn)定表達載體上，同時我們可以根據(jù)客戶的要求對每個載體添加分泌信號肽或純化標(biāo)簽。在此基礎(chǔ)上，我們還可以幫助客戶優(yōu)化流程，生產(chǎn)出高效穩(wěn)定的細(xì)胞系。

2.穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建
穩(wěn)定基因表達是將目的基因克隆到哺乳動物穩(wěn)定表達載體上，整個實驗操作流程分為轉(zhuǎn)染，篩選、細(xì)胞分離和評估（評估克隆在無血清培養(yǎng)條件下的表達量和適應(yīng)性），目的是使之可以長期穩(wěn)定生產(chǎn)。

3.瞬時轉(zhuǎn)染表達（TGE）
相較于穩(wěn)定基因表達，TGE主要用于短期內(nèi)制備蛋白。我們的瞬時表達使用的是無血清懸浮培養(yǎng)的方法，在完成表達純化后，交付給客戶重組蛋白。（注：轉(zhuǎn)染后的檢測包括：PCR檢測目的基因，SDS-PAGE及Western blot檢測目的蛋白的表達情況）

4.生產(chǎn)工藝優(yōu)化
我們會對表達過程及表達產(chǎn)物進行及時優(yōu)化，預(yù)測細(xì)胞表達量的同時還會對增長率，轉(zhuǎn)種率，細(xì)胞群，以及表達條件等進行全面分析。

5.重組蛋白鑒定
通過親和層析，離子交換層析和凝膠過濾層析等方法純化蛋白之后，我們有完備的蛋白檢測手段：SDS-PAGE或Native-PAGE檢測，Western blotting，吸收光譜，N末端序列測定，質(zhì)譜分析，核磁共振波譜分析。

細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染蛋白表達能夠在短期內(nèi)得到毫克至克級的重組蛋白，廣泛地應(yīng)用于基因產(chǎn)物的快速表達及蛋白質(zhì)的小規(guī)模制備等方面。細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染表達能夠快速靈活的制備重組蛋白，細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后1-4天內(nèi)即能可收獲并進行分析。以CHO（中國倉鼠卵巢細(xì)胞）和HEK293（人胚腎細(xì)胞）為表達宿主進行懸浮培養(yǎng)，能夠獲得大量的培養(yǎng)上清液，可生產(chǎn)毫克至克級的重組蛋白。目前，瞬時表達技術(shù)已廣泛應(yīng)用于抗體生產(chǎn)，疾病診斷，疫苗開發(fā)等多個領(lǐng)域。

服務(wù)項目	服務(wù)內(nèi)容	服務(wù)周期	交付內(nèi)容
基因合成 亞克隆	基因合成	3~4周	基因構(gòu)建 測序報告
	載體構(gòu)建
	質(zhì)粒制備
瞬時轉(zhuǎn)染	細(xì)胞傳代培養(yǎng)	1~2周	瞬時轉(zhuǎn)染表達與檢測 純化報告 純化產(chǎn)物
	細(xì)胞轉(zhuǎn)染
	收獲細(xì)胞
表達純化	表達小試	3~4周

哺乳動物CHO穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建服務(wù)，與瞬時轉(zhuǎn)染不同，穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建是指外源基因進入受體細(xì)胞并整合到細(xì)胞的染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達目的基因，因此也稱為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。

項目	服務(wù)內(nèi)容	構(gòu)建周期	最終交付
基因合成&亞克隆	密碼子優(yōu)化&基因合成	4周	表達載體；
	載體構(gòu)建&質(zhì)粒制備		測序報告；
細(xì)胞轉(zhuǎn)染	細(xì)胞轉(zhuǎn)染	4周	3株穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株； 0.5~1mg 90%； 純度蛋白；
	表達檢測（WB或ELISA）
穩(wěn)定細(xì)胞系構(gòu)建	壓力篩選	2月
	穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株篩選
	蛋白生產(chǎn)
	細(xì)胞凍存